肉類DNA提取-武漢友名生物公司

elisa定量測定
elisa操作步驟復雜，影響反應因素較多，肉類dna提取，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法elisa，標準曲線的范圍一般較寬，曲線*高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈s形，其頭、尾部曲線趨于平坦，*較呈直線的部分是相對理想的檢測區(qū)域。
測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。標準曲線的形狀因*盒所用模式的差別而略有不同。elisa測定的標準曲線注意圖中橫坐標為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。
適用于ｐｃｒ研究的快速提取法：
1 田間剪取植株新鮮葉片5-10ｍｇ(約2ｃｍ長)左右，新鮮葉片放于1 5ｍｌ離心管中，存于冰盒中，根據(jù)樣品號貼上相應的標簽。
2 用剪刀將葉片組織剪細(約0 5ｃｍ長)放在點穴式研板中。
3 加入400μｌｄｎａ提取緩沖液，用玻棒將葉組織研細，直到液體變成深綠色即可。
4 再加400μｌｄｎａ提取緩沖液，混合均勻，轉(zhuǎn)入一新的1 5ｍｌ離心管(貼上相應的編號)。
5 加400μｌ氯1仿，混合均勻后，2400×ｇ離心30ｓ，將上清液轉(zhuǎn)入一支新的1 5ｍｌ離心管(貼上相應的編號)。
6 加800μｌ無水乙醇，混勻，2400×ｇ離心3ｍｉｎ。棄上清。
7 70%乙醇沖洗，風干。
8 用50μｌｔｅ緩沖液溶解，存于-20℃。
9 取1μｌ用于ｐｃｒ分析。
dna提取過程中各種*的作用及原理
溶液ii-naoh-sds液：naoh：核酸在ph大于5，小于9的溶液中，是穩(wěn)定的。但當phgt;12或phlt;3時，就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。 在溶液ii中的naoh濃度為0.2mo1/l，加抽提液時，該系統(tǒng)的ph就高達12.6， 因而促使染色體dna與質(zhì)粒dna的變性。
sds：
sds是離子型表面活性劑。它主要功能有：
(1)溶解細胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而*細胞膜。
(2)解聚細胞中的核蛋白。
(3)sds能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為r-o-so3-…r -蛋白質(zhì)的復合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。 但是sds能*核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中 (用rnase去除rna時)受到干擾。
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