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dna連接酶與dna聚合酶的區(qū)別?
形成方式不同
dna連接酶是在兩個dna部分片段之間形成*二酯鍵,*化酶,不是在單個核苷酸與dna部分片段之間形成*二酯鍵。dna連接酶都不能催化兩條游離的dna鏈相連接。
dna聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的dna1片段上,形成*二酯鍵。dna聚合酶起到催化劑的作用,催化原來的dna進(jìn)行復(fù)1制,然后將原來的dna和復(fù)1制以后的dna進(jìn)行模板配對后,連接聚合在一起,就可以形成新的dna鏈。
所有合成cdna條鏈的方法都要用依賴于rna的dna聚合酶(反轉(zhuǎn)錄酶)來催化反應(yīng),主要有兩個關(guān)鍵因素,一個是mrna模板,另一個是反轉(zhuǎn)錄酶 。商品化反轉(zhuǎn)錄酶有從禽類成髓細(xì)胞瘤病毒純化到的禽類成髓細(xì)胞病毒(amv)逆轉(zhuǎn)錄酶和從表達(dá)化的moloney鼠病毒反轉(zhuǎn)錄酶*的大腸中分離到的鼠病毒(mlv)反轉(zhuǎn)錄酶。amv反轉(zhuǎn)錄酶包括2個具有若干種酶活性的多肽亞基,這些活性包括依賴于rna的dna合成,依賴于dna的dna合成以及對dna-rna雜交體的rna部分進(jìn)行內(nèi)切降解(rna酶h活性)。mlv反轉(zhuǎn)錄酶只有單個多肽亞基,兼?zhèn)湟蕾囉趓na和依賴于dna的dna合成活性,但降解dna—rna雜交體中的rna的能力較弱。且其熱穩(wěn)定性較amv反轉(zhuǎn)錄酶差。mlv反轉(zhuǎn)錄酶能合成較長的edna(如大于2~3kb)。amv反轉(zhuǎn)錄酶和mi。v反轉(zhuǎn)錄酶利用rna模板合成cdna時的適ph、適鹽濃度和適溫度各不相同.所以合成鏈時相應(yīng)調(diào)整條件是非常重要的。
dna連接酶與dna聚合酶用途不同
dna連接酶主要用于*工程,將由限制性核酸內(nèi)切酶“剪”出的粘性末端重新組合,故也稱“*針線”。如*工程中,大腸桿1菌連接酶連接黏性末端,t4連接酶既可連接黏性末端,又可連接平末端。
dna聚合酶在dna copy中起做用,主要是連接dna部分片段與單個脫氧核苷酸之間的*二酯鍵。
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